矮牽牛原生質(zhì)體的分離 是植物細(xì)胞工程中的一個(gè)重要技術(shù)手段,它涉及從植物組織中去除細(xì)胞壁以獲得具有完整細(xì)胞膜和細(xì)胞器的原生質(zhì)體。這一過(guò)程對(duì)于研究植物細(xì)胞的生理、遺傳以及生物技術(shù)應(yīng)用(如基因轉(zhuǎn)化、細(xì)胞融合等)具有重要意義。分離原理原生質(zhì)體的分離基于酶解法,通過(guò)特定的酶組合(如纖維素酶、果膠酶等
矮牽牛原生質(zhì)體的分離 是植物細(xì)胞工程中的一個(gè)重要技術(shù)手段,它涉及從植物組織中去除細(xì)胞壁以獲得具有完整細(xì)胞膜和細(xì)胞器的原生質(zhì)體。這一過(guò)程對(duì)于研究植物細(xì)胞的生理、遺傳以及生物技術(shù)應(yīng)用(如基因轉(zhuǎn)化、細(xì)胞融合等)具有重要意義。
分離原理
原生質(zhì)體的分離基于酶解法,通過(guò)特定的酶組合(如纖維素酶、果膠酶等)降解細(xì)胞壁,從而釋放出完整的原生質(zhì)體。這些酶的選擇與濃度、處理時(shí)間及溫度等條件密切相關(guān),需要根據(jù)不同的植物種類(lèi)進(jìn)行優(yōu)化。
操作步驟
- 材料準(zhǔn)備:選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的矮牽牛葉片作為實(shí)驗(yàn)材料。
- 酶溶液配制:根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道或預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,配制適宜濃度的酶溶液,通常包括0.5%-2%的纖維素酶和0.2%-1%的果膠酶,同時(shí)加入適量的滲透壓穩(wěn)定劑(如山梨醇)。
- 材料預(yù)處理:將選取的葉片切成小片(約1-2mm2),并用蒸餾水沖洗干凈后,放入預(yù)先準(zhǔn)備好的酶溶液中。
- 酶解反應(yīng):在25-30°C條件下,輕輕搖晃培養(yǎng)皿,使酶液與葉片充分接觸,酶解時(shí)間一般為1-3小時(shí),具體時(shí)長(zhǎng)需視實(shí)際情況調(diào)整。
- 過(guò)濾與清洗:酶解完成后,使用尼龍網(wǎng)(孔徑約為100μm)過(guò)濾,收集濾液;然后用含有相同滲透壓調(diào)節(jié)劑的緩沖液多次洗滌,去除殘留的酶和其他雜質(zhì)。
- 原生質(zhì)體純化:可通過(guò)密度梯度離心進(jìn)一步純化原生質(zhì)體,提高其活力和純度。
- 活力檢測(cè):采用臺(tái)盼藍(lán)染色法或熒光顯微鏡觀察等方法評(píng)估原生質(zhì)體的存活率。
- 儲(chǔ)存與使用:將活力良好的原生質(zhì)體懸浮于適宜的培養(yǎng)基中,短期可放置于4°C冰箱保存,長(zhǎng)期則需冷凍干燥或超低溫保存。
注意事項(xiàng)
- 酶解過(guò)程中,溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響酶活性,進(jìn)而影響原生質(zhì)體的產(chǎn)量和質(zhì)量。
- 操作時(shí)應(yīng)盡量輕柔,避免對(duì)原生質(zhì)體造成機(jī)械損傷。
- 實(shí)驗(yàn)用水和所有器具均需嚴(yán)格滅菌,防止微生物污染。
- 不同來(lái)源的矮牽牛可能需要調(diào)整酶解條件,以達(dá)到效果。
通過(guò)上述步驟,可以有效地從矮牽牛葉片中分離出高活力的原生質(zhì)體,為進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。
品名:矮牽牛種子
高度:20~40cm
特點(diǎn):花量大,顏色艷麗,花期長(zhǎng),適應(yīng)性好。
種植量:16~36/平米
種植期:四季/視地區(qū)
適播地:排水通暢,光照充足,不挑土壤。
供應(yīng)規(guī)格:種子/盆栽苗